ENDOCLING® 内毒素去除试剂盒

ENDOCLING® 内毒素去除试剂盒
1.1 内毒素介绍
内毒素脂多糖分子(LPS) 是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分，由菌体特异性多糖、非特异性核心多糖和脂质 A 三部分构成。内毒素对哺乳动物有很显著的致热性，少量的内毒素静脉注射就可以引起发烧，大剂量时可以引起感染性休克、败血症、多器官功能性衰竭等。生物制药中抗体药作为一类靶向药物由于用量较大，对内毒素限度的要求更高，由于抗体药生产和纯化工艺都十分复杂，有诸多环节可能将内毒素带入其中，因此简单且快速的去除内毒素可以为产品的研发、生产提供有利保障。

1.2 试剂盒组分
ENDOCLING® 是一款高效内毒素去除试剂盒，它以内毒素结合蛋白作为配体通过化学键固定在聚合物磁性微球上，由于其带有磁性，进行特异性的内毒素清除后很容易进行分离和去除，经ENDOCLING® 内毒素去除试剂盒纯化的样品最终内毒素低于 2EU/ml。

表1： ENDOCLING®内毒素去除磁珠的主要特性

项目	性能
基质	聚合物磁性微球
配体	内毒素结合蛋白
结合能力	1ml去除20000-25000EU的内毒素
磁珠浓度	10mg/ml
适用样品	抗原、多肽、抗体、细胞因子、质粒、AAV和慢病毒等
储存温度	2-8℃
储存缓冲液	0.01M PBS(pH=7.4)

1.3 保存与运输运输：冰袋运输，不可冻结。保存：2-8 ℃冷藏保存，不可冻结。

2. 产品特点

1)ENDOCLING® 内毒素去除试剂盒更适用于内毒素含量不超过 4000EU/ml 的样品，随着内毒素含量的增加去除效果会下降，不建议使用本产品去除内毒素含量超过 10000EU/ml 的样品，在含有 2500EU/ml、250EU/ml、25EU/ml、2.5EU/ml 脂多糖 (Escherichia coli O55:B5) 的样品中，可以一次性将内毒素去除至 2EU/ml 以下；
2)ENDOCLING® 内毒素去除试剂盒操作步骤简单，只需要将 ENDOCLING® 内毒素去除磁珠清洗后加入样品中摇晃孵育 60min，通过磁力架富集磁珠就可以去除样品中的内毒素；
3)ENDOCLING® 内毒素去除试剂盒不会影响样品性状如质粒的超螺旋、抗体的纯度，且能够在温和的条件下特异性吸附内毒素，产品回收率≥95%；
4) 产品使用方便，ENDOCLING® 内毒素去除试剂盒中提供无热源清洗缓冲液、移液枪头、磁力架（可选）等。

3. 使用方法

3.1 计算磁珠使用量磁珠使用量需要考虑两个因素：首先需要根据磁珠载量判断使用量，1ml 内毒素去除磁珠可去除 20000-25000EU 内毒素，根据样品中内毒素的含量计算出使用磁珠的体积，比如 1ml 的样本中含有 2000EU 的内毒素，而 1ml 磁珠可去除 20000EU 内毒素，计算得出加入 100μl 磁珠即可达到去除内毒素的目的；其次需要根据样本体积来决定最终的磁珠使用量，为了保证磁珠和样品中的内毒素充分接触，磁珠的使用体积不能低于样本体积的 10%, 比如 20ml 样本中含有 20000EU 内毒素，根据载量判定 1ml 磁珠已经够用，但由于样本体积为 20ml，需要加入2ml 的磁珠进行内毒素去除。
3.2 清洗磁珠磁珠使用前上下颠倒混匀，用无热源枪头吸取对应体积的内毒素去除磁珠于无热源的离心管中（请在无菌环境下如超净台或者生物安全柜中取用）并放置在磁力架上。待磁珠全部吸附至管壁后去除保护液，加入3倍体积的ENDOCLING®Wash Buffer重悬磁珠，轻轻颠倒混匀3-5次，再将悬液置于磁力架上，同样待磁珠完全吸附在离心管壁后吸弃上清，重复 3-5 次。
3.3 内毒素去除加入少量体积的样本重悬内毒素去除磁珠，再将重悬后的磁珠全部加入样品中，4℃或者常温摇晃孵育 60min，最后将样品和内毒素去除磁珠的混合物放置于磁力架上，待磁珠完全吸附在离心管壁后吸出样品进行后续检测。