surePAGE预制胶使用说明书
发布时间：2020-12-09 07:47:10 点击：
简介：SurePAGE 预制胶是Express Plus 的升级产品，它是一款高性能的小型聚丙烯酰胺凝胶，能满足客户上样量大的需求。其独特的胶板设计可以提高条带分辨率，改善样品在上样孔里的分布状态，使得条带更加均匀。该预制胶为Bis-Tris 凝胶缓冲系统，比常规的 Tris-Glycine 系统具有更强的缓冲能力， 于pH6.4 的弱酸性条件下灌注，能够更好地减少聚丙烯酰胺的降解，提高凝胶稳定性。
SurePAGE 预制胶不含有 SDS，依赖于采用合适的电泳缓冲液和相应试剂，是 SDS-PAGE 和非变性凝胶电泳的理想材料。依赖特有的灌注技术可以保证预制胶批次间稳定性和条带分布一致性。SurePAGE 预制胶配套使用 Tris-MOPS 或 Tris-MES 电泳缓冲液，能够实现高效、可靠地分离蛋白质，便于后续染色或转膜检测。
SurePAGE 预制胶提供不同浓度的梯度胶和固定浓度胶。梯度胶的浓度包括4-20%、4-12% 和8- 16%；固定浓度胶包括8%、10%和12%。每种浓度的预制胶都有10个点样孔、12个点样孔和15个点样孔三种规格。胶板尺寸：长×宽×高为100 × 80 ×4.7 mm；凝胶尺寸：长×宽×厚为80×70×1 mm。
主要特点:
- 上样量大 — 最大上样量可达80 μl, 高于其他公司同类产品
- 简单易用 — 特殊上样口设计，使用普通10 μl 移液枪头快速上样
- 高分辨率 — 蛋白条带分离更为清晰和均一
- 超长保质期 —2-8 ℃可保存12个月
- 兼容性胶板设计 — 适合大多数小型电泳槽
- 重复性高 —不同批次预制胶的一致性好
- 物美价廉 — 节约实验成本
1、凝胶选择指导
表1. 凝胶选择指导
| 产品编号 |
丙烯酰胺浓度 |
孔数 |
上样孔体积 |
电泳缓冲液 |
转移缓冲液 |
分离范围 |
| M00661 |
8% |
10 |
80 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
180-20 kDa |
| M00664 |
10% |
10 |
80 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
160-20 kDa |
| M00667 |
12% |
10 |
80 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
120-6.5 kDa |
| M00655 |
4-20% |
10 |
80 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
250-10 kDa |
| M00658 |
8-16% |
10 |
80 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
160-10 kDa |
| M00652 |
4-12% |
10 |
80 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
250-20 kDa |
| M00662 |
8% |
12 |
60 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
180-20 kDa |
| M00665 |
10% |
12 |
60 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
160-20 kDa |
| M00668 |
12% |
12 |
60 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
120-6.5 kDa |
| M00656 |
4-20% |
12 |
60 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
250-10 kDa |
| M00659 |
8-16% |
12 |
60 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
160-10 kDa |
| M00653 |
4-12% |
12 |
60 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
250-20 kDa |
| M00663 |
8% |
15 |
40 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
180-20 kDa |
| M00666 |
10% |
15 |
40 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
160-20 kDa |
| M00669 |
12% |
15 |
40 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
120-6.5 kDa |
| M00657 |
4-20% |
15 |
40 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
250-10 kDa |
| M00660 |
8-16% |
15 |
40 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
160-10 kDa |
| M00654 |
4-12% |
15 |
40 μl |
MOPS, MES |
Tris-Bicine |
250-20 kDa |
下图的蛋白迁移表可以帮助您选择合适的凝胶进行蛋白电泳
2、.可兼容电泳槽
SurePAGE 预制胶可兼容以下电泳槽：
3、SurePAGE 预制胶的使用简介
A.电泳缓冲液和电泳槽的准备
- 取一包电泳缓冲液粉末 (Tris-MOPS-SDS Running Buffer Powder，产品编号：M00138) 溶解在 1 L 的去离子水中制成 1×电泳缓冲液。
- 将 SurePAGE 预制胶从包装袋中取出，撕掉胶板底部的胶带（见图 1）
- 平稳地将梳子从胶板中推出（见图 2）
- 将胶板放入凝胶电泳装置中。请参阅电泳装置制造商的使用说明。 Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetra System 电泳槽的使用注意事项: 将电泳槽内框架的绿色硅橡胶密封条取出，然后将其平坦的一面朝外并重新插回内框架的凹槽中（见图3）。
图3. SurePAGE 预制胶在Bio-Rad Mini-PROTEAN
® Tetra System 电泳槽中的使用
图 4. SurePAGE 预制胶在 Bio-Rad 电泳槽的使用
5、在电泳槽的内槽中倒入足够的 1× MOPS 或 MES 电泳缓冲液使其覆盖上样孔 5-7 mm，在外槽中加入相同的电泳缓冲液以确保适当的冷却。为了获得最好的效果，外槽的缓冲液需要加到与内槽持平的位置或稍低，但不可漫过胶板（
注意：1. 相对于 MOPS 电泳缓冲液来说，MES 更适合用于小蛋白的分离；2.Tris-Glycine 电泳缓冲液与SurePAGE 预制胶的 Bis-Tris 缓冲系统不兼容， 请不要使用。）
6、使用注射器或其他工具吸取适量 1×的电泳缓冲液，将上样孔轻轻冲洗干净，去除气泡和残留的储存缓冲液。
B.样品的制备
SDS-PAGE凝胶电泳
5x Loading Buffer配方 |
| SDS |
1.0 g |
| 甘油 |
5.0 ml |
| 溴酚蓝 |
25 mg |
| Tris base |
150 mg |
| β-巯基乙醇 |
1.0 ml |
| 去离子水 (使用 8 M NaOH或8 M HCl调 pH 至6.8) |
加至10 ml |
10x MES 电泳缓冲液配方: |
| Tris base |
60.6 g |
| MES |
97.6 g |
| SDS |
10 g |
| EDTA |
3 g |
| 去离子水 (使用8 M NaOH或8 M HCl调pH至7.3) |
加至1000 ml |
10x
MOPS 电泳缓冲液配方:
| Tris base |
60.6 g |
| MOPS |
104.6 g |
| SDS |
10 g |
| EDTA |
3 g |
| 去离子水 (使用8 M NaOH或8 M HCl调pH至7.3) |
加 至 1000 ml |
| 样品处理： |
| 蛋白样品 |
x μl |
| 蛋白样品缓冲液 (5x) |
2 μl |
| 去离子水 |
加 至 10 μl |
| 上样前将样品加热至100℃，十分钟。 |
非变性PAGE凝胶电泳SurePAGE 预制胶的pH为6.4，SurePAGE 不含SDS 可用于酸性蛋白(pI＜6.4)的非变性电泳，但不能用于碱性蛋白的非变性电泳。要想获得理想的电泳结果，需要您对样品蛋白的结构做分析， 对电泳时间和电泳缓冲液的pH做一个摸索。
5x sample buffer:
| 甘油 |
5.0 ml |
| 溴酚蓝 |
25 mg |
| Tris base |
150 mg |
| 去离子水 (使用8 M NaOH 或8 M HCl 调pH至6.8) |
加 至 10 ml |
1x MES 电泳缓冲液配方:
| Tris base |
6.06 g |
| MES |
9.76 g |
| EDTA |
0.3 g |
去离子水
(使用8 M NaOH 或8 M HCl 调pH 至7.3) |
加至1000 ml |
10x
MOPS 电泳缓冲液配方:
| Tris base |
60.6 g |
| MOPS |
104.6 g |
| EDTA |
3.0 g |
| 去离子水 |
加至1000 ml |
注意事项：金斯瑞提供的电泳缓冲液粉末（Tris-MOPS-SDS Running Buffer Powder，目录号： M00138）含有SDS，所以
不适合非变性电泳。
| 样品处理 |
| 样品 |
x μl |
| 蛋白样品缓冲液(5x) |
2 μl |
| 去离子水 |
加至10 μl |
| 不要加热。 |
电泳过程：让上样枪头的尖端垂直插入到上样孔中能够获得最佳的上样效果，枪头不能戳破胶体，更不能使胶板变形导致样品漏孔（见图5）
注意事项：最佳上样量必须通过实验来确定，样品过量会导致条带的拖尾和失真。加入过量的含自由状态碳水化合物的蛋白，可能会导致条带变形或者蛋白无法穿入胶中（见故障诊断）。
将电泳槽盖子盖好，并将电源线插头插入电泳仪电源插孔（红对红，黑对黑），在140 V 电压下电泳 45-55分钟直至溴酚蓝条带跑到凝胶底部（见表3）。
| 电压 |
开始电流 |
结束电流 |
电泳时间* |
| 140 V |
75-100 mA |
30-50 mA |
45-55 分 钟 |
| *凝胶的电泳时间取决于实验室的温度，这些电泳时间是依据实验室中20℃的MOPS、MES缓冲液得来的 |
重要注意事项：
- 确保使用兼容的电泳槽，内外槽之间液体的泄漏会导致低迁移率（见故障诊断）。
- 电泳时间可能会改变，取决于电源和凝胶浓度。
从胶板中取出凝胶（见图6）
- 电泳结束后，根据电泳槽制造商的使用说明从电泳槽中取出预制胶。
- 通过撬具或其他合适的工具小心的插入到胶板之间的空隙。
- 用撬具慢慢地上下撬动胶板，重复上述操作，撬动上、中、下三个不同的位置，直至胶板两侧被完全分开。注意小心并最好佩戴护目镜，以免发生人身伤害。
- 打开之后，凝胶可能粘在胶板的任意一侧，将无凝胶的胶板取下，将有凝胶的胶板上有胶一侧浸入水中贴着水面，胶板倾斜轻轻提起，凝胶掉入水中后，将凝胶从水中取出进行染色（使用后的胶板和梳子请以医疗垃圾或实验废弃物处置，不可投入生活垃圾桶中）。
图6. 打开胶板取出凝胶
